Gwyneth Paltrow interpretou a professora substituta Holly Holliday, papel que lhe rendeu um Emmy em 2011 na categoria Melhor Atriz Convidada em Série de Comédia. Seu cover de Forget You, música de Cee Lo Green, é uma das músicas mais baixadas da série no iTunes
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A atriz e cantora Kristin Chenoweth interpretou a divertida alcoólatra April Rhodes, antiga paixão de Will Schuester
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Victor Garber apareceu na primeira temporada como pai de Will Schuester
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Jonathan Groff, famoso por seus papéis Broadway, é Jesse St. James, rival do coral Glee, ex-namorado de Rachel e atual treinador do Vocal Adrenaline
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Molly Shannon apareceu na 1ª temporada como a professora de astronomia e badminton Brenda Castle
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A rapper Eve fez uma breve participação na 1ª temporada como Grace Hitchens, treinadora do grupo Jane Addams Girls Chior
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O cantor Josh Groban apareceu em dois episódios da primeira temporada interpretando a si próprio
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Cheyenne Jackson (centro) apareceu em alguns episódios na pele de Dustin Goolsby, um dos consultores do Vocal Adrenaline
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Kathy Griffin foi uma espécie de Sarah Palin, que atuou como jurada em uma das competições entre corais
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A estrela da Broadway Idina Menzel é Shelby, mãe biológica de Rachel e mãe adotiva do filho de Quinn e Puck. Ela deixou o emprego de treinadora do Vocal Adrenaline e formou um novo grupo musical dentro do colégio McKinley, que acabou desfeito após a primeira derrota em competições de corais
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John Stamos foi Dr. Carl Howell, um dentista que mexeu com o coração de Emma. Participou de quatro episódios
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Neil Patrick Harris, estrela da série How I Met Your Mother, interpretou Bryan Ryan, antigo rival de Will Schuester
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Charice participou da 2ª temporada de Glee como a estudante Sunshine Corazon, que pediu transferência do colégio por conta do bullying que sofreu de Rachel
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Carol Burnett foi Doris Sylvester, a mãe ausente de Sue que tem princípios nazistas
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Britney Spears foi tema de um dos episódios da segunda temporada de Glee. Brittany e Santana passam por algumas alucinações após uma anestesia durante consulta com o dentista Carl e a primeira acaba se encontrando inesperadamente com a princesinha do pop
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Katie Couric interpretou uma repórter que faz uma matéria especial sobre a derrota de Sue Sylvester no campeonato de líderes de torcida
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Ricky Martin interpretou o professor de espanhol David Martínez
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Nene Leakes, do reality show The Real Housewives of Atlanta (que inspirou o Mulheres Ricas no Brasil), é Roz Washington, treinadora de nado-sincronizado
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Jeff Goldblum e Brian Stokes Mitchell são Hiram e LeRoy Berry, os pais gays de Rachel
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Matt Bomer, galã de White Collar, interpretou Cooper Anderson, irmão mais velho de Blaine
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Thomas Calabro, da série Melrose Place, aparecerá na trama como o pai de Puck
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Whoopi Goldberg entrará na reta final da série interpretando Carmen Tibideaux, uma importante professora da New York Academy of the Dramatic Arts (NYADA), que viajará até Ohio para avaliar as audições de Rachel e Kurt, que lutam por uma vaga nesta escola de artes
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Lindsay Lohan, que já foi alvo de piadas na série, interpretará a si própria no último episódio da terceira temporada. Ela será uma das juradas da etapa nacional da disputa entre corais
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